Naveni® 原位近接連接技術：空間蛋白質互作研究新一代精準檢測工具
一、技術概述
Naveni® 原位鄰近連接技術（Naveni in situ Proximity Ligation Assay，簡稱 Naveni PLA）由瑞典 Navinci Diagnostics AB 基于經典鄰位連接原理迭代開發，是當前空間蛋白質組學領域單分子級原位可視化檢測技術，專門用于固定細胞、冰凍 / 石蠟組織切片中內源蛋白互作、蛋白翻譯后修飾的定性、定位與定量分析。
傳統免疫熒光僅能實現蛋白共定位，無法區分蛋白是否發生真實結合；Co-IP、FRET 等體外檢測手段會破壞細胞天然空間結構、丟失亞細胞定位信息。Naveni PLA 突破上述短板，僅當兩個靶蛋白空間距離＜40 nm（發生直接 / 間接相互作用）時才會產生特異性熒光信號，每個離散熒光點對應一組蛋白互作復合物，真正實現原位、內源、單分子、可定量檢測，無需外源蛋白過表達，大程度還原細胞生理微環境真實分子狀態。
核心工作原理（五步標準化反應流程）
整套反應依托 Navenibody 寡核苷酸偶聯二抗、DNA 環化連接、滾環擴增（RCA）三重信號放大體系，特異性層層鎖死，大幅降低非特異性背景：
樣本封閉
專用封閉緩沖液封閉細胞 / 組織非特異性吸附位點，消除一抗、Navenibody 非特異結合，壓低熒光背景。
雙一抗靶向識別
選用兩種不同宿主來源一抗，分別靶向兩個互作蛋白（或同一蛋白兩個不同表位），僅特異性結合內源靶標蛋白，不干擾蛋白天然構象。
Navenibody 探針結合
孵育 Navenibody（偶聯專屬寡核苷酸鏈的物種特異性二抗），分別結合兩種一抗，攜帶可互補配對的 DNA 臂；主流型號 NaveniFlex Cell MR 適配小鼠 + 兔源一抗組合，覆蓋絕大多數常規科研抗體。
鄰近依賴 DNA 環化（特異性核心步驟）
只有兩個 Navenibody 因蛋白相互作用空間靠近，兩端寡核苷酸鏈才能互補配對，在連接酶作用下閉合形成環狀 DNA 模板；無蛋白結合、單純共定位不滿足距離條件時，無法完成環化，無后續信號，從根源杜絕假陽性。
滾環擴增與熒光成像
聚合酶以環狀 DNA 為模板啟動滾環擴增，生成含上千重復序列的長鏈 DNA；加入 Atto647N/Red 熒光標記探針雜交，產生明亮、離散點狀熒光信號，借助共聚焦、熒光顯微鏡完成成像與定量統計。
三、核心技術突出優勢
1. 超高檢測靈敏度，適配低豐度內源蛋白
依托 RCA 滾環擴增實現千倍級信號放大，可捕捉傳統 IF 無法檢出的低表達蛋白、瞬時弱蛋白互作、早期病理蛋白聚集體（如 α- 突觸核蛋白聚集），無需質粒過表達改造細胞，規避外源標簽干擾蛋白天然功能。
2. 特異性，無共定位假陽性
信號產生嚴格依賴 40 nm 以內分子鄰近效應，僅真實蛋白結合事件發光；普通免疫熒光共染僅能證明蛋白同區域分布，無法判定相互作用，二者實驗結論存在本質差異。
3. 完整保留空間信息，適配多類型生物樣本
全程在固定完整細胞、組織切片原位完成檢測，不裂解細胞、不破壞亞細胞分區；兼容貼壁細胞、細胞爬片、細胞甩片、FFPE 石蠟切片、冰凍組織，配套細分 **NaveniFlex Cell（細胞專用）、NaveniFlex Tissue（組織專用）** 兩大試劑盒產品線。
4. Atto647N 近紅外熒光低背景成像（主流推薦方案）
代表產品 NaveniFlex Cell MR Atto647N（貨號 NC.MR.100/60017）搭載 Atto647N 熒光基團：激發 646 nm、發射 664 nm，屬于遠紅外波段，避開細胞自發熒光區間，相比傳統 Texas Red、Orange 熒光，背景噪音更低、光穩定性更強，適配共聚焦、STED 超高分辨顯微鏡、數字病理掃描儀，支持多通道復合染色（搭配 DAPI 核染）Navinci。
5. 結果可數字化定量，適配高通量篩選
熒光亮點可通過圖像分析軟件自動計數，量化蛋白互作豐度；試劑盒配套 96 孔板標準化實驗方案，適用于藥物干預高通量蛋白互作篩選、靶點抑制劑藥效評價。
6. 對比初代 Duolink PLA 全面優化
Navinci 新一代 Naveni 體系優化緩沖液配方、探針特異性：石蠟組織染色無彌散霧狀背景，陰性對照無雜信號；試劑穩定性提升，酶組分耐受反復凍融，同等實驗條件下信噪比顯著優于傳統 Duolink 試劑盒
四、主流試劑盒產品線（科研高頻選用型號）
1. NaveniFlex Cell 系列（細胞樣本專用）
NC.MR.100（貨號 60017）：Cell Atto647N，小鼠 + 兔一抗配對，100 次反應，近紅外熒光，實驗室采購量最高；
NC.MR.Red：Cell Red 紅色熒光，小鼠兔配對，適配普通熒光顯微鏡；
NC.GR.100/NC.GM.100：山羊兔、山羊小鼠一抗組合，滿足多抗體搭配需求。
2. NaveniFlex Tissue 系列（石蠟 / 冰凍組織專用）
3. 配套輔助試劑
NaveniLink：用戶自有一抗偶聯寡核苷酸試劑盒，實現直接 PLA 檢測；NaveniControl Kit：專用陰陽性對照試劑盒，保障實驗質控穩定。
五、全領域科研應用場景
1. 腫瘤生物學研究
1）腫瘤微環境膜蛋白互作：PD-1/PD-L1、整合素 - 粘附分子原位結合檢測，評估免疫檢查點激活水平；
2）腫瘤信號通路：β-catenin/E-cadherin、EGFR 下游激酶互作，解析增殖、侵襲轉移分子機制；
3）靶向藥物篩選：給藥前后蛋白互作豐度定量，直觀驗證藥物靶點抑制效果。
2. 神經退行性疾病機制
檢測 α- 突觸核蛋白、Tau 蛋白早期寡聚聚集，捕捉疾病發病前期微量病理分子事件，適用于阿爾茨海默、帕金森病理基礎研究。
3. 細胞信號與翻譯后修飾
原位檢測蛋白磷酸化、泛素化、甲基化修飾：將修飾位點特異性一抗與總蛋白一抗配對，直接可視化蛋白修飾位點，替代體外 Western blot，直觀展示修飾在細胞核 / 胞漿 / 膜上的分布差異。
4. 發育與干細胞生物學
干細胞分化過程中轉錄因子互作、細胞連接蛋白結合動態觀測，解析細胞命運調控網絡。
5. 免疫細胞互作研究
T 細胞、巨噬細胞表面受體配體原位結合檢測，揭示免疫細胞活化、浸潤分子基礎。
六、實驗質控與操作要點
樣本分區處理：細胞固定選用 4% 多聚甲醛，避免甲醇過度通透破壞蛋白復合物；石蠟切片充分抗原修復，保證一抗結合效率。
試劑儲存規范
Navenibody 探針、稀釋緩沖液 2–8℃冷藏不可冷凍；連接酶、擴增聚合酶、Atto647N 熒光擴增液 - 20℃避光保存，分裝減少反復凍融。
對照設置（實驗有效）
陰性對照：去除其中一種一抗，無熒光亮點；陽性對照：試劑盒配套標準互作蛋白切片，可見大量離散熒光點。
成像參數
Atto647N 通道采用 Cy5 標準濾片組，降低曝光時間減少熒光淬滅，搭配 DAPI 藍色核染實現雙通道共定位成像。
七、技術總結
Naveni® 原位近接連接技術補齊傳統蛋白互作檢測手段的短板，集原位保留空間結構、單分子高靈敏、嚴格特異性、可數字化定量、低背景熒光成像五大優勢于一體，是當前空間蛋白質組、腫瘤病理、神經科學、藥物篩選領域不可替代的核心科研工具。其中 NaveniFlex Cell MR Atto647N（NC.MR.100/60017）作為細胞實驗通用啟動試劑盒，適配絕大多數常規鼠 / 兔一抗組合，成為國內高校、科研院所、第三方檢測平臺主流采購型號
